RPA与LAMP对比
LAMP:环介导等温扩增法的特征是针对目标DNA链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃)、经一个步骤即可完成。
RPA:主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。
RPA技术
01 特别快,传统PCR要45分钟,进口横向流动试纸条哪家好,因为要反复升温降温。RPA由于是恒温,进口横向流动试纸条哪家好,所以只需要3-10分钟。
02 灵敏度高,进口横向流动试纸条哪家好,因为是高度定向扩增,所以样品即便有点儿杂质也OK,免除了前处理环节,尽量多的保留了样本。
03 温度控制要求低,一般是加热到40℃,但是在紧急情况下,贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃,也是可以运行,就是慢点儿,横向流动试纸条哪家好,要等一个小时而已。
04 适用性强,面对RNA病毒,直接在试剂里加入逆转录酶就好,一锅端。
TwistDx恒温扩增应用
TwistDx公司开发的重组酶聚合酶扩增(RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp 核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。
RPA反应的适宜温度在37℃~42℃之间,*变性,常温下即可反应,大大加快了PCR的速度。并且由于不需要温控设备,RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。RPA检测的灵敏度很高,能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可检出水平,从单个模板分子得到大约1012扩增产物。*复杂样品处理,即可实地检测;既可扩增DNA也可扩增RNA,省去额外的cDNA合成步骤;检测方式多样:终点检测、对扩增过程进行实时监控或通过侧流层析试纸条(LFD)读取结果。
试剂盒包括两类:①.TwistAmp冻干研发试剂盒(包括TwistAmp Basic试剂盒、TwistAmp exo 试剂盒和TwistAmp nfo 试剂盒共三种);②. TwistAmp液态研发试剂盒(包括TwistAmp Liquid Basic 试剂盒和TwistAmp Liquid exo 试剂盒共两种)
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